改良GAM琼脂培养基的原理和使用方法

一、试验原理

  用途：用于脆弱拟杆菌的分离培养。

  原理：䏡胨、胰酪蛋白胨、大豆胨、酵母浸粉、牛肉浸粉、牛肝浸粉提供微生物生长所需的氮源、碳源、矿物质、维生素等；消化血清粉能够有效促脆弱拟杆菌的生长；葡萄糖提供碳源；磷酸二氢钾能够调节pH；氯化钠维持渗透压；可溶性淀粉能够吸收中和有毒的代谢产物；L-半胱氨酸和硫乙醇酸钠能够降低培养基氧化还原电位，有利于厌氧菌生长；琼脂是凝固剂。添加剂中的氯化血红素、维生素K1和脱纤维兔血能够有效促脆弱拟杆菌的生长；抗生素抑制其他细菌生长。

二、培养基配方（g/L）

三、试验方法

  1、称取本品71.8 g，加热溶解于1000 mL蒸馏水中，分装三角瓶，115℃高压灭菌15 min，冷却至50℃左右，每200 mL改良GAM琼脂需要添加1支无菌0.02%维生素K1，1支改良GAM琼脂抑菌剂，氯化血红素0.5 g，脱纤维兔血14 mL，混匀，倾入无菌平皿，备用。

  2、制备质控菌株菌悬液，划线接种于待测培养基。

  3、放置于36℃±1℃恒温培养箱中，厌氧培养48 h。

四、质控结果

  接种以下质控菌株，放置于36℃±1℃恒温培养箱中，厌氧培养48 h。试验结果如图所示。

图1改良GAM琼脂培养基的质控菌株培养结果

五、注意事项

  1、培养基中含有淀粉，若灭菌前未加热溶解，灭菌后可能出现少量白色沉淀。

  2、每瓶需配套添加4盒HB8462a 0.02%维生素K1溶液和4盒HB8462b 改良GAM琼脂抑菌剂(含三种抗生素)和2100500氯化血红素和脱纤维兔血（可以用1001339-1脱纤维羊血替代兔血）。

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